Hoefer TE22 - Manuale (Pagina 24)

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Proteine trasferimenti
Sommari
Gershoni e Palade (1982) hanno studiato i fattori
che influenzano il recupero delle proteine da gel
SDS su nitrocellulosa o carta DBM. Secondo i loro
risultati, metanolo nel sistema tampone Towbin
è necessario per conseguire legame efficienti per
nitrocellulosa. Metanolo migliora obbligatorio
in parte, eliminando legato alle proteine SDS. In
assenza di metanolo, etichettati albumina di siero
bovino (BSA) passa attraverso almeno cinque
strati di membrane. Il metanolo può causare un
gel a ridursi, comunque, così il tasso di eluizione
diminuisce. Utilizzando una membrana catio-
nico (ad esempio nylon), che lega le proteine
più efficiente, e omettendo metanolo dal buffer
di trasferimento, e Gershoni Palade ottenuto un
trasferimento più quantitativa. Lo svantaggio
di membrana cationico è che macchie proteiche
anche legano bene, in modo che la colorazione
di fondo tende ad essere molto elevato. Corret-
tamente spenta, tuttavia, questo documento può
essere utilizzata per la rilevazione di anticorpi o
altri metodi di sovrapposizione di identificazione
proteina. Una sintesi di tipo a membrana e la
concentrazione di metanolo raccomandato segue:
Tipo di membrana Metanolo %
Nylon caricato 0
Nitrocellulosa ≤ 20
PVDF ≤ 15
Alcuni lavoratori hanno riferito che ci una
bassa concentrazione di SDS (0,1%) migliora il
trasferimento della proteina da un gel di SDS.
Burnette (1981) e Symington et al. (1981) hanno
studiato l’effetto del peso molecolare della
proteina. Gibson (1981) descrive un metodo per
aumentare il grado di trasferimento di proteine
grandi mediante clivaggio con pronasi limitata
durante il trasferimento.