Hoefer TE22 - Manuale (Pagina 14)

•
p6
Mettere una 3 mm di spessore spugna schiuma sulla
cassetta aperto sommersa e premere delicatamente
fino a tutta l’aria viene espulsa. Mettere un foglio di
carta assorbente sulla spugna, e quindi posizionare
la membrana sulla carta assorbente. Porre il gel che
contiene un campione che è stato separato elettro-
foreticamente e equilibrata (se richiesto) con tampone
di trasferimento, sulla membrana. Delicatamente roto-
lare una pipetta di vetro o provetta sul gel di espellere
aria intrappolata tra la membrana e il gel. Coprire
il gel con un foglio di carta assorbente e quindi
posizionare una spugna dello spessore adeguato (vedi
schema sottostante), ancora una volta una leggera
pressione per espellere l’aria intrappolata.
4
Chiudere la cassetta e premere leggermente per bloc-
care le schede. La cassetta raccolta, deve tenere il gel
a stretto contatto con la membrana senza comprimere
il gel. Se la pila sembra allentata, aggiungere fogli di
carta assorbente, se lo stack sembra stretto, sostituire
la spugna superiore (sul gel) con un foglio di carta
assorbente. Se si rimuove la spugna basso (sotto il
gel), sostituire almeno due fogli di carta assorbente per
creare spazio tra la membrana e il pannello cassetta.
uno spugna 3 mm per gel
> 1,5 mm
-O-
un 6 spugna mm per gel
≤ 1,5 mm.
carta assorbente
carta assorbente
uno 3 millimetri spugna
gel
membrana
Fig 2. Trasferire gruppo impilato.
Lo stack è orientato in modo
che le molecole caricate nega-
tivamente migrare verso l’anodo
grigio (+).
Importante! Non overstuff
la cassetta.
Nota: Prova a mettere il gel corret-
tamente la prima volta perché le
proteine può iniziare a trasferire
immediatamente; volta che il
trasferimento è iniziato, spostando
il gel alterare i risultati o causare
bande ombra sul blot.
I pannelli a cassetta sono colorate:
nero (in alto) = catodo lato grigio
(in basso) = lato anodo.
Montare la cassetta in un
vassoio contenente buffer di
trasferimento di circa 3 cm di
profondità.