Hoefer TE22 - Manuale (Pagina 16)

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L’assemblaggio finale e il trasferimento
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Installare il coperchio
Le cassette sono codificati per colore per abbinare
i cavi nel coperchio. Per trasferire verso l’anodo,
orientare il coperchio in modo che la metà grigia
della cassetta affaccia l’anodo (+), o piombo rosso,
nero e la metà della cassetta di fronte al catodo (–),
o piombo nero. Assicurarsi che la banana si inserisce
sede nei connettori nel coperchio.
2
Utilizzare solo un alimentatori approvati come il
Hoefer PS2A200, PS200HC o PS300B. Assicurarsi
che l’alimentazione è spento e tutti i controlli sono
impostati a zero. Collegare i cavi colorati dal coper-
chio dell’unità di trasferimento nella supply-il potere
filo rosso nel jack di uscita rosso e il filo nero nel jack
di uscita nero. Nella maggior parte dei sistemi, il cavo
rosso è l’anodo (+), e il cavo nero è il catodo (–).
3
Raffreddamento è fortemente raccomandato
Qualsiasi impostazione che si traduce in superiori a
5 W di potenza genera calore sufficiente a richiedere
il controllo attivo di calore. Un bagno circolatore
refrigerata con acqua deve essere impostato a circa
10 °C. (Se si utilizza 50/50 etilene glicole/acqua, la
temperatura può essere inferiore.) Chill il buffer prima
dell’uso, se possibile.
Nota: Fare attenzione a orientare
il coperchio in modo che tutte le
specie migrano verso la membrana
quando il campo elettrico
viene applicato. La direzione
di migrazione dipende sia dalle
caratteristiche del campione e il
pH del tampone di trasferimento.
Se le specie di interesse è cari-
cato negativamente in tampone
di trasferimento e la pila viene
montata in modo che la membrana
è più vicino al lato grigio della
cassetta, allora questo lato si
affaccia l’anodo (+). La maggior
parte delle proteine migrare
verso l’anodo nella Tris/glicina
sistema tampone Towbin/metanolo
(indipendente dalla presenza di
SDS), e nella maggior parte delle
condizioni, gli acidi nucleici sono
caricate negativamente e anche
migrare verso l’anodo.
Importante! Non permettere mai
che la temperatura del tampone
superare i 45 °C. Il calore ecces-
sivo provoca l’unità a deformarsi.
Parametri di trasferimento tipici
Parametri per il vostro campione e sistema
tampone deve essere determinato empiricamente.
Proteina Acidi Nucleici
Buffer Towbin 1X TBE o 1X TAE
Corrente (A) 0,4 0,3
Tensione (V) ~100 50
Tempo trasferimento ~1 ora ~1 ora
Temp. refrigerante 10 °C 10 °C o meno