Hoefer TE22 - Manuale (Pagina 20)

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problema soluzione
Modelli di banda diffusa Transfer immediatamente dopo la separazione elettroforetica. Se
equilibrante prima del trasferimento, ridurre o eliminare il tempo di
equilibrio o spostare il gel alla sala freddo durante equilibrio.
Se buffer di trasferimento contiene metanolo (≥ 10%), equilibrare
il gel in tampone di trasferimento per 30 minuti per consentire a
compattare prima di assemblare la pila. Nota: Poiché il metanolo
provoca il gel a ridursi leggermente, molecole di grandi dimensioni
possono migrare più lentamente.
Prelevare il gel viene tenuto fermamente contro la membrana e che
esso non si sposti quando avviene il contatto.
Se riscaldamento eccesso si verifica durante il trasferimento, abbas-
sare la temperatura del fluido di raffreddamento nello scambiatore di
calore.
Verificare che la superficie preferita legame della membrana (even-
tuale) contatta il gel.
Binding inefficiente alla membrana
Parametri chimico
Fissare o reticolare la molecola sulla membrana secondo le esigenze
del acidi nucleici, proteine , o di tipo a membrana.
Preparare il trasferimento tampone proteica senza SDS.
Verificare che la quantità ottimale di metanolo richiesto per il tipo
di membrana e controllare la soluzione tampone. Aggiungere
10-20% metanolo al buffer di trasferimento per migliorare legame
nitrocellulosa.
Membrana parametri Indossare i guanti quando si maneggiano le membrane.
Membrane Conservare a temperatura ambiente dalla luce solare
diretta per mantenere le membrane attivato.
Utilizzare una membrana con dimensione dei pori inferiore (0,10-
0,20 µm) se le proteine passano attraverso la membrana, o utilizzare
un diverso tipo di membrana.
Inserire una membrana sia sopra che sotto il gel se si sospetta una
proteina si muove nella direzione opposta dalla maggior parte delle
proteine . Controllare entrambe le membrane per la proteina(s).
Verificare campione troppo è disponibile per la superficie legame
applicando due membrane invece di uno. Se “soffiare” si verifica,
ridurre il carico campione.
Per ulteriori suggerimenti di risoluzione dei problemi,
fare riferimento alla Bjerrum, O.J. et al. (1988).