Hoefer TE22 - Manuale (Pagina 22)

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Fattori che influenzano il trasferimento
Parametri quali le caratteristiche del campione,
il tipo di membrana, dimensione dei pori gel e il
buffer di trasferimento utilizzato tutti contribu-
iscono alla trasferibilità delle macromolecole, e
dovrebbe essere tenuto in considerazione durante
lo sviluppo di un protocollo. Specie molecolari
molto piccole, per esempio, passare rapidamente
ma spesso non si legano come pure molecole di
dimensioni maggiori; grandi molecole impegnare
in modo più efficiente, ma non eluire dal gel più
rapidamente. La velocità di eluizione è anche
influenzato dalla dimensione dei pori del gel e
l’orientamento delle molecole.
Inoltre, il grado in cui molecole si legano alla
membrana è influenzato dalle caratteristiche
membrana come dimensione dei pori e il tipo
e le caratteristiche tampone come tipo di sale
di pH, e la concentrazione, e la presenza di
detergenti quali sodio dodecil solfato (SDS). Le
condizioni necessarie per eluizione efficace può
non coincidere con le condizioni ottimali per il
legame. Per trovare le condizioni ottimali per
il trasferimento del campione, bilanciare questi
effetti: se la frequenza di campionamento di
eluizione è lento, un periodo più lungo di trasfe-
rimento può essere richiesto. (Nella nostra espe-
rienza, i trasferimenti a bassa tensione per lunghi
periodi non offrono molto miglioramento.) Se
binding campione è inadeguato, provare diverse
condizioni del tampone. Per una rassegna
completa, vedere Gershoni e Palade (1983).
Se il sistema tampone di trasferimento è diverso
dal sistema tampone per elettroforesi, il gel deve
essere equilibrata con tampone di trasferimento
prima del trasferimento a garantire gonfiore o
contrazione si verifica prima che i contatti gel la
membrana di trasferimento. Se questo passaggio
viene saltato, distorsione banda o la perdita di
risoluzione potrebbe causare.