Hoefer TE22 - Manuale (Pagina 19)

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Risoluzione dei problemi
problema soluzione
Trasferimento incompleto
Aree vuote sulla membrana Rimuovere tutte le sacche d’aria intrappolate nel gruppo impilato
trasferimento: assemblare lo stack mentre è immerso in tampone
di trasferimento, premere delicatamente su ogni spugna come è
aggiunto alla pila, e rotolare una pipetta di vetro o provetta sulla
membrana e gel di eliminare tutte le bolle d’aria.
Ridurre la velocità di agitazione per evitare turbolenze.
Process una sola striscia o la membrana in ciascun vassoio o cassetta
per evitare sovrapposizioni.
Utilizzare tampone con una forza inferiore ionica.
Continuità elettrodo Check. Durante il trasferimento, un flusso
continuo di gas viene rilasciato lungo l’intera lunghezza degli
elettrodi. Se non si formano bolle tutta la lunghezza dell’elettrodo,
sostituire l’elettrodo.
Se cassette sono piegato quando è vuoto, sostituire. Riempiendo
eccessivamente la cassetta la fa a piegarsi, vedi le istruzioni di
montaggio raccomandate a pagina 6.
Griglia su membrana Aggiungere altri fogli di carta assorbente per aumentare la distanza
tra il pannello cassetta e il gel. Fare attenzione a non overstuff la
cassetta, il gel deve essere tenuto saldamente e in modo uniforme tra
le spugne, ma non così strettamente che si è spremuto.
Molecole non migrano di gel Aumentare l’intensità del campo.
Aumentare periodo di trasferimento. (Prova raddoppio.)
Non utilizzare la colorazione o il fissaggio agenti sul gel prima
del trasferimento.
Utilizzare un gel sottile.
Ridurre la concentrazione di acrilamide gel.
Verificare che il pH tampone è vicino al pH desiderato. La maggior
parte dei buffer non deve essere titolato; fare tampone fresco.
Utilizzare 3,5 mM SDS (0,1%) nel tampone di trasferimento.
Evitare di inserire metanolo nel buffer di trasferimento o ridurre la
quantità al minimo assoluto.
Utilizzare il reagente di grado sostanze chimiche.
Aumentare la durata del tempo sono depurinated Southern blot.
Aumentare la carica netta sulla proteina modificando ad un buffer
di trasferimento con un pH diverso. PH inferiore (<6-7) aumenta la
carica positiva di proteine , pH superiore (>6-7) aumenta la carica
negativa sulle proteine .