Leica Biosystems HER2 FISH System - 30 Test - Manuale (Pagina 8)

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Leica Biosystems Leica HER2 FISH System - 30 Test Istruzioni per l'uso TA9217 IT-CE-Rev_D 08/04/2013
7. Per un nuovo kit Leica HER2 FISH System - 30 Test, scansionate il codice a barre del
vassoio dei reagenti con lo scanner manuale per inserire il sistema nell'inventario dei
reagenti Leica BOND (solo codice a barre singolo).
8. Preparate il Leica BOND Enzyme 5 nel Leica BOND Open Container fornito, diluito a
1:300. Ad esempio per 10 vetrini aggiungete 10 µl di Leica BOND Enzyme Concentrate 2
a 2990 µl di Leica BOND Enzyme Diluent.
9. Scansionate il Leica BOND Open Container fornito e registrate come Bond Enzyme 5.
10. Andate alla schermata di impostazione Vetrino e fate clic su Aggiungi caso.
11. Inserite i dettagli riguardanti il primo caso. Verificate che il volume dispensato sia pari a
150 µl e che il protocollo di preparazione sia *Dewax. Fate clic su OK.
12. Con il caso evidenziato nella schermata di impostazione Vetrino, fate clic su Agg. Vetr.
13. Per prima cosa, aggiungete i vetrini test del paziente. Verificate che il tipo di tessuto sia
impostato come Tessuto per il test.
14. Selezionate la modalità colorazione Singola.
15. Selezionate processo ISH.
16. Selezionate *LSI HER2/CEP17 Dual Probe – 30 Test dall'elenco sonde. Il tab dei Protocolli
si sposta automaticamente sul protocollo di colorazione corretto (*FISH Protocol A),
protocollo HIER (*HIER 25 min with ER1 (97)), protocollo EIER (*Enzyme 5 for 25 min),
denaturazione (*D10) e ibridazione (*ISH Hybridization (12Hr)).
17. Ripetete le fasi da 10 a 16 finché non vengono creati i vetrini e i controlli test dei pazienti
(vetrini di controllo e/o controlli interni Leica HER2 FISH). Stampate le etichette del
vetrino.
18. Etichettate i vetrini in maniera corretta.
19. Aprite i coperchi di tutti i contenitori Leica HER2 FISH System - 30 Test e caricate il
vassoio dei reagenti nel Leica BOND-MAX and BOND-III System.
20. Applicate i nuovi Covertiles a ciascun vetrino.
21. Caricate il vassoio dei vetrini nel Leica BOND-MAX and BOND-III System e premete il
pulsante Carica/Scarica.
22. Confermate che i vetrini sono stati scansionati e cliccate su Run (Play) nella schermata
stato sistema per avviare immediatamente la seduta (per il Leica HER2 FISH System si
raccomanda di eseguire questa analisi durante la notte utilizzando la funzione di avvio
programmato automatico).
23. Verificate che nel campo indicatore vassoio compaia Proc (OK) e che vengano visualizzati
il numero di lotto e l'ora di fine.
24. Quando la seduta è completa premete il pulsante Carica/Scarica e rimuovete i vassoi dei
vetrini dal Leica BOND-MAX and BOND-III System.
25. Rimuovete i Covertiles e risciacquate i vetrini con acqua deionizzata.
26. Disidratate rapidamente in due passaggi di alcol, asciugate.
27. Dispensate 20µl di DAPI direttamente sul campione.
28. Applicate il vetrino coprioggetti e fate in modo che la soluzione si spanda completamente,
facendo attenzione a rimuovere eventuali bolle d'aria.
29. Sigillate il bordo del vetrino coprioggetti con del mastice, o con un prodotto analogo.
30. Collocate i vetrini al buio per facilitare lo sviluppo del segnale prima di esaminarli con un
microscopio a fluorescenza.
31. Per preservare l'intensità del segnale, conservate i vetrini colorati ad una temperatura di
-20 °C.
G. Conservazione dei vetrini
Conservare i vetrini al buio e ad una temperatura di -20 °C. Portare i vetrini da -20 °C a
temperatura ambiente prima di esaminarli.