Leica Biosystems HER2 FISH System - 30 Test - Manuale (Pagina 7)

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Leica Biosystems Leica HER2 FISH System - 30 Test Istruzioni per l'uso TA9217 IT-CE-Rev_D 08/04/2013
modelli di microscopio. I set di filtri consigliati per il Leica HER2 FISH System - 30 Test
sono DAPI/9-Orange dual bandpass, DAPI/Green dual bandpass, Green/Orange(V.2)
dual bandpass e DAPI/Green/Orange (V.2) triple bandpass.
C. Metodologia
• Prima di applicare questa metodologia, gli utilizzatori devono imparare adeguatamente
la tecnica delle fluorescenza automatizzata in situ.
• Ciascuna sezione test colorata con LSI HER2/CEP17 Dual Probe rende possibile la
stessa analisi cellulare dei segnali sia di HER2 che del centromero del cromosoma 17.
Un rapporto successivo tra i segnali di HER2 e quelli del cromosoma 17 consentirà di
assegnare un valore quantitativo al campione, indicando un risultato negativo (non-
amplificato) o positivo (amplificato). I risultati incerti (limite) (1,8-2,2) devono essere
interpretati con cautela. Includete altri 20 nuclei e ricalcolate il rapporto.
D. Pretrattamento enzimatico BOND
Prima della colorazione, diluire il Leica BOND Enzyme Concentrate 2 fornito a 1:300
utilizzando il Leica BOND Enzyme Diluent in uno dei Leica BOND Open Containers forniti.
Ad esempio, per colorare 10 vetrini, preparare 3 mL di soluzione enzimatica pronto uso
diluendo 10 µl di Leica BOND Enzyme Concentrate 2 in 2990 µl di Leica BOND Enzyme
Diluent. Si raccomanda di preparare l'enzima prima di ogni seduta di colorazione e di
utilizzare un volume minimo di 900 µl per ogni seduta.
E. Protocollo di colorazione predefinito
Si raccomanda di usare il Leica HER2 FISH System - 30 Test con il protocollo di
colorazione predefinito indicato nella Tabella 2 qui sotto.
Tipo Protocollo Nome Protocollo
Colorazione *FISH Protocol A
Preparazione *Dewax
HIER *HIER 25 min with ER1 (97)
Enzima *Enzyme 5 for 25 min
Denaturazione *D10
Ibridazione *ISH Hybridization (12Hr)
Tabella 2: Leica HER2 FISH System - 30 Test Staining Protocol predefinito
F. Fasi di procedura
Queste istruzioni vanno lette insieme al manuale d'uso del Leica BOND-MAX and BOND-III
System. Un nuovo Leica BOND Universal Covertile deve essere usato per ciascun vetrino.
L'utilizzo di Leica BOND Universal Covertiles, precedentemente usati per la colorazione
per ibridazione in situ o immunoistochimica, non è stato validato dal presente test.
1. Sul Leica BOND-MAX and BOND-III System, accertatevi che i contenitori per rifiuti sfusi
e pericolosi abbiano la capacità sufficiente per le sedute di colorazione necessarie.
2. Accertatevi che vi sia sufficiente alcol, acqua distillata o deionizzata, Leica BOND
Dewax Solution, Leica BOND Epitope Retrieval Solution 1 e Leica BOND Wash Solution
nei contenitori di reagenti sfusi per eseguire le sedute di colorazione necessarie.
3. Verificate che sia stata installata una Leica BOND Mixing Station pulita.
4. Accendete il Leica BOND-MAX and BOND-III System.
5. Accendete il PC collegato al Leica BOND-MAX and BOND-III System.
6. Aprite il software Leica BOND.