Hoefer SE400 - Manuale (Pagina 39)

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6. Risoluzione gel overlay
(0,375 M TrisCl, 0,1% SDS, pH 8,8, 100 ml)
1,5 M Tris-Cl, pH 8,8 (Soluzione #2) 0,375 M 25,0 ml
10% SDS (Soluzione #4)
3,5 mm 1,0 ml
H
2
O deionizzata a 100,0 ml
Memorizza fino a 3 mesi a 4 °C al buio.
—OR—
Saturo d’acqua n-butanolo
Agitare n-butanolo e H
2
O deionizzata in un imbuto
separatore. Rimuovere il acquosa (inferiore) di fase.
Ripetere questa procedura diverse volte. Utilizzare la
fase superiore.
—OR—
Se una sovrapposizione interferisce con il protocollo
preferito, isolare il gel dall’ossigeno atmosferico
ponendo un pettine preparativa gel o soluzione prec-
edente sul gel.
7. 2X Sample buffer di trattamento
(0,125 M TrisCl, 4% SDS, 20% glicerina,
0,2 mM DTT*, pH 6,8, 10 ml)
0,5 M Tris Cl, pH 6,8 (Soluzione #3) 0,125 M 2,5 ml
10% SDS, 0,35 M (Soluzione #4)
0,14 M 4,0 ml
Glicerina (FW 92,09) 20% v/v 2,0 ml
Ditiotreitolo (DTT) (FW 154,2) 0,2 mM 0,31 g
Blu di bromofenolo (FW 691,9) 0,3 mM 2,0 mg
H
2
O deionizzata a 10,0 ml
* or 2-mercaptoethanol (FW 78,13) 2% v/v 0,2 ml
Dividere in aliquote di 1,0 ml e conservare a -40 °C a -80 °C
per un massimo di 6 mesi.
—OR—
6X Sample buffer di trattamento
(0,35 M TrisCl, 10% SDS, 30% glicerina, 9,3% DTT,
pH 6,8, ~10 ml)
0,5 M TrisCl, pH 6,8 (Soluzione #3) 0,35 M 7,0 ml
SDS (FW 288,4) 0,35 M 1,0 g
Glicerina (FW 92,09) 30% v/v 3,0 ml
DTT (FW 154,2) 0,6 M 0,93 g
Blu di bromofenolo (FW 691,9) 0,175 mm 1,2 mg
Dividere in aliquote di 1,0 ml e conservare a -70 °C.