Hoefer SE400 - Manuale (Pagina 21)

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2.2.3 Gradiente gel
Gel gradiente lineari può essere versato nel gel
caster. Per gradiente di facilità di miscelazione,
si consiglia di utilizzare uno dei produttori di
SG Hoefer gradiente della serie. Gel gradiente
vengono versate dalla parte superiore della ruota
con una cannula se si utilizza il gel caster fornito
o dal basso se si utilizza un multiplo caster gel
Hoefer (vedere le istruzioni che accompagnano il
caster). Una volta che il gradiente di gel polimer-
izza, un gel di impilamento viene versato.
1
Montare il gruppo lastra di vetro nel caster come
descritto nella sezione 2.1.2.
2
Impostare il percorso di soluzione di monomero di
flusso. Eseguire un pezzo di tubo in vinile traspar-
ente attraverso una pompa peristaltica. Collegare
un’estremità del tubo alla porta di uscita gradiente
maker e l’altra estremità ad una cannula 20 cm. (Il
diametro esterno della cannula deve essere inferiore
allo spessore distanziatore.) Posizionare la cannula
in modo che appoggi sul fondo del sandwich, a metà
strada tra i distanziatori.
3
Preparare la soluzione di monomero. Calcolare il
volume totale necessario. Preparare una metà di
questo volume maggiore e l’altra metà della soluzi-
one% inferiore acrilammide. (Opzionale: Aggiungere
15% di saccarosio o glicerolo 25% [concentrazione
finale] alla soluzione% in più per migliorare la strati-
ficazione.)
Nota: Con Coomassie Blu ™ , è
possibile rilevare 1 µg in una
singola banda. Con le macchie
d’argento più sensibili, è
possibile rilevare un minimo
di 10 ng.
Fig 6. Versando un gradiente
di gel.