Hoefer SE400 - Manuale (Pagina 19)

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2.2 L’acrilamide gel di preparazione
Tabella 1. Approssimativo volume di soluzione di mono-
mero richiesto per un gel singola
Gel spessore (mm)
Modello 0,75 1,00 1,5
SE400 15 ml 23 ml 30 ml
SE410 23 ml 34 ml 45 ml
2.2.1 Risoluzione di gel
1
Preparare la soluzione di monomero e versare il gel.
Preparare la quantità richiesta di soluzione di mono-
mero, deareare, e aggiungere l’iniziatore e catalizza-
tore appena prima di versare il gel.
2
Preparare la soluzione in un angolo del sandwich,
facendo attenzione a non introdurre eventuali bolle
d’aria. Vedi sotto per il livello soluzione adeguata:
No stacking gel (sistema continuo). Riempire soluzi-
one appena sotto il bordo superiore della piastra supe-
riore. Se le bolle sono in trappola, rimuovere con una
pipetta o una siringa. Introdurre un pettine (con una
leggera angolazione) in ogni sandwich, facendo atten-
zione a non intrappolare bolle d’aria sotto i denti.
2-gel sandwich. Preparare la soluzione in entrambi i
panini, riempiendo ciascuna allo stesso livello sotto il
bordo dentellato.
Stacking gel. Riempire soluzione a 3-4 cm sotto la parte
superiore della lastra di vetro. Questa altezza permette 1
cm di gel di impilamento al di sotto del pozzetti. Versare
il gel e applicare un overlay (vedi punto 3). Dopo che il
gel è impostato, la preparazione del gel di impilamento,
come descritto nella sezione successiva.
2-D elettroforesi (sistema discontinua). Per il gel
seconda dimensione risolvere, riempire soluzione a
~1,0 cm sotto la parte superiore della lastra di vetro
(lasciare spazio per un gel di impilamento, se neces-
sario). Un centimetro consente spazio sufficiente
per la prima striscia IPG dimensione o gel tubo e
un sigillo di agarosio. (Durante il trasferimento, fare
attenzione a non intrappolare aria tra il gel tubo e
lastra di gel, gel sigillare il tubo in posizione con
agarosio in tampone di elettroforesi.)
Nota: l’appendice A a pagina
29, elenca le ricette per il
sistema gel Laemmli.