Hoefer HE99X - Manuale (Pagina 22)

RNA mobilità
RNA possono essere separati sulla base delle
dimensioni. Per evitare anomalie dovute alla
struttura secondaria, RNA viene denaturato
prima o durante l’elettroforesi. Ad esempio,
frammenti di RNA precedentemente denaturato
con gliossale e dimetilsolfossido possono essere
separati su gel di agarosio neutri, oppure RNA
può essere frazionato su gel di agarosio conte-
nenti idrossido metilmercurico o formaldeide
Campioni di RNA di solito richiedono lunghe
percorrenze o tamponi che sono facilmente
esauriti, e la circolazione lo richiedano. Il Hoefer
SUB20C e SUB25C unità orizzontali sono racco-
mandati per questa applicazione, piuttosto che
il HE33.
DNA di rilevamento
Il DNA può essere rilevato mediante la fluore-
scenza del bromuro di etidio o legato tramite
autoradiografia di DNA radiomarcato.
Etidio bromuro (0,5 µg/ml) può essere aggiunto
al tampone di corsa per monitorare il progresso
campione perché fluorescenza del colorante sotto
una lampada UV rivela posizione banda. (Per
verificare i progressi, spegnere l’alimentazione e
rimuovere il coperchio dell’unità di agarosio. In
possesso di un portatile lampada UV vicino al
vassoio in esecuzione. Rimettere il coperchio e
accendere di nuovo per riprendere elettroforesi.)
In alternativa, dopo elettroforesi, il gel macchia
in una soluzione di bromuro di etidio (0,5 µg/ml
H
2
O) per 15 a 60 minuti e quindi visualizzare
o fotografare il campione su un transillumina-
tore UV.
Per fotografare il gel, o riporlo in esecuzione
sulla superficie del transilluminatore o far
scorrere il gel sulla superficie per l’esposizione
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Attenzione! Etidio bromuro
è un noto agente mutageno.
Indossare sempre guanti durante
la manipolazione.
Attenzione! Indossare occhiali di
protezione UV e proteggono la
pelle quando si utilizza qualsiasi
fonte di luce UV.
Nota: il bromuro di etidio
rallenta la migrazione del DNA
di circa il 15%.
Nota: minimizzare il tempo
di colorazione per evitare che
piccoli frammenti di acido
nucleico da diffondendo al di
fuori del gel.
Nota: Per un esempio di
elettroforesi RNA, fare
riferimento alla Molecular
Cloning: A Laboratory Manual by
J. Sambrook and D.W. Russell.