Hoefer HE99X - Manuale (Pagina 15)

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Preparazione per l’elettroforesi
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Facoltativo: Per monitorare il progresso di sepa-
razione, o aggiungere 0,5 µg/ml (conc finale.) Di
bromuro di etidio al tampone di corsa ora o aggiun-
gere 50 µg/ml (conc finale.) Bromuro di etidio al
tampone campione. Per visualizzare i propri progressi,
spegnere l’alimentazione, rimuovere il gruppo coper-
chio, e tenere una lampada portatile UV vicino al gel.
Nota: l’aggiunta di bromuro di etidio al tampone di
corsa o il campione di migrazione rallenta legger-
mente. Rilevamento da questo metodo non è sensibile
come dalla colorazione dopo la corsa elettroforetica.
Vedere la sezione rilevamento del DNA, per maggiori
dettagli (pagina 14).
2
Riempire la camera con tampone fino a che il gel
viene immerso ~
~1 mm.
3
Caricare i campioni. Aggiungere il campione a 1/5
volume di tampone di caricamento del campione.
Mescolare ogni campione e di carico in un pozzo con
una micro-pipetta, avendo cura di evitare la puntura
del fondo del pozzetto o intrappolare bolle.
4
Porre il coperchio sul dispositivo in modo che il
catodo (cavo nero) è vicina alla fine degli esempi.
(Campioni di acido nucleico migrare verso l’anodo.)
5
Collegare i cavi colorati (rosso con rosso e nero con
nero) ad un alimentatore approvato. Impostare la
tensione e timer (se disponibile). Gel di agarosio sono
tipicamente funzionare a tensione costante in un
gradiente di tensione nell’intervallo di 2-5 V/cm. La
distanza tra gli elettrodi è ~
~26 cm, quindi una regola-
zione di 130 risultati V in un gradiente di 5 V/cm.
Attenzione! Indossare occhiali
di protezione UV e proteggono
la pelle quando si usa una
lampada UV.
Nota: Fare riferimento ai buffer,
i volumi, e la sezione appunti
per ulteriori informazioni e linee
guida a pagina 10.
Vedere pagina 12 per una
ricetta tampone campione
di carico e volumi e per i
vari formati pettine in gel di
diverso spessore.
Importante! Se si esegue due
serie di campioni in un gel,
monitorare attentamente la
corsa e fermare elettroforesi
quando il colorante indicatore
avvicina ai pozzi nel centro.