Hoefer IEF100 - Manuale (Pagina 27)

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Preparazione strisce IPG
Gel di pH immobilizzato (IPG) sono ultra gel di poliacrilammide
su film sottili di supporto in plastica. I gel sono realizzati con un
gradiente di pH legato covalentemente alla matrice gel. I gel sono
stabili e riproducibili. I gel sono forniti disidratati e devono essere
conservati a temperature di -20 °C o inferiore.
Le strisce IPG hanno uno (+) acida e una estremità di base (–) end.
Immagini 2D gel sono tipicamente indicati con il lato acida a sini-
stra, e che è l’orientamento delle strisce IPG nel IEF100. L’elettrodo
corretta deve essere applicato a ciascuna estremità: anodica (+) elet-
trodo all’estremità acido (sinistra) e catodica (–) alla fine elettrodo di
base (a destra).
Le strisce secche richiedono reidratazione prima della corsa. Tipi-
camente, vari reagenti differenti sono inclusi nella soluzione di
reidratazione per solubilizzare le proteine , e consentire successo foca-
lizzazione isoelettrica. La reidratazione è in genere fatto a temperatura
ambiente, o 20 °C, e ha bisogno di un minimo di 8 ore per un buon
assorbimento della soluzione reswelling. È spesso più conveniente
per consentire di reidratazione verificarsi durante la notte. Durante la
reidratazione, le strisce IPG sono coperti in olio minerale per impedire
la perdita di umidità, e prevenire cristallizzazione urea.
Le strisce sono IPG reidratate usando uno dei reidratazione/equili-
bramento vassoi forniti con il IEF100. Proteina campione può essere
aggiunto alla striscia IPG in questa fase. Le strisce IPG sono trasferiti
al IEF100 per la messa a fuoco.