Hoefer SE250 - Manuale (Pagina 24)

problema soluzione
Campione Stained raccoglie: Vicino alla parte anteriore del buffer:
• Proteine non è sufficientemente limitato dal gel risolvere;
aumentare la% T.
Nella parte superiore del gel quando il fronte di buffer ha
raggiunto il fondo:
• La dimensione dei pori gel è troppo piccola. Diminuire il
T% del gel risolvere.
• La proteina è precipitata. Riscaldare il campione ad una
temperatura più bassa (70 °C o meno) per 1–2 minuti.
Fascia bassa risoluzione • Utilizzare solo i reagenti di altissima qualità.
• Effettuare la separazione ad un valore inferiore di corrente o
tensione.
• Dializzare o desalificare del campione.
• Ridurre il volume del campione o la concentrazione.
• Utilizzare solo urea appena deionizzata.
• Migliorare la dissociazione della subunità dal riscaldamento del
campione in tampone campione SDS 1–2 minuti a 100 °C.
• Aggiungi più mercaptoetanolo o ditiotreitolo;
controllare trattamento del campione.
• Utilizzare solo gel che sono stati recentemente preparati.
• PH valori di controllo della separazione e soluzioni di
stacking gel. Non titolare di ritorno buffer.
Preparazione del campione:
• Campioni di calore per non più di 1–2 minuti a 100 °C.
Conservare sul ghiaccio dopo il riscaldamento.
• Conservare campione sul ghiaccio prima che sia denaturato.
• Aggiungere inibitori della proteasi, se necessario, per
impedire la degradazione proteolitica di campione.
• Conservare i campioni devono essere congelati in aliquote
per evitare il congelamento e lo scongelamento ripetuti.
(Conservare a -40 °C a -80 °C.)
• Versare un gel più alto impilamento. (Per ottenere risultati
ottimali, permettono una altezza gel di impilamento di
2,5 volte l'altezza del campione nel pozzo.)
• Smaltire le soluzioni obsolete di acrilammide e usare solo il
più alto grado di acrilammide.
• Quando la preparazione dei campioni, evitare di utilizzare
le soluzioni con un elevato di sodio o di concentrazione di
potassio.
•
p16
Blu bromofenolo non affilare in
una zona concentrata nel gel di
impilamento