Hoefer SE250 - Manuale (Pagina 17)

3.4 Preparazione dei campioni e di carico
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Se fonti sono già in atto, passare al punto 2.
Se del caso, il cast del gel di sovrapposizione nel
gruppo.
Calcolare il volume di gel di impilamento monomero
soluzione: misurare la distanza, in cm, dalla sommità
del gel risolvere alla tacca nella piastrina di allumina.
(Questo dovrebbe essere di almeno 2 cm di più se
la profondità del campione nel bene è insolitamente
alto.) Moltiplicare questa distanza dalla larghezza gel
(8,3 cm) e lo spessore gel (cm). Questo prodotto è il
volume richiesto in ml.
Disaerare l'impilamento soluzione di monomero gel,
aggiungere catalizzatore e promotore e poi versate.
Usare una pipetta per offrire la soluzione in un angolo
del piatto, facendo attenzione a non intrappolare
bolle. Inserire un pettine (con una leggera angolazione
per evitare che l'aria trapping) nel panino, permet-
tendo ai lati pettine per riposare sui distanziali.
Sovrapposizione ciascun gel con un sottile strato di
acqua satura n-butanolo, acqua, o tampone gel diluito
per evitare l'esposizione all'ossigeno gel. Lentamente
fornire la soluzione overlay da una siringa di vetro
dotato di 22-gauge. Applicare la soluzione in prossim-
ità del distanziatore a lato del sandwich e consentono
di fluire attraverso la superficie nudo. Lasciare un
minimo di un'ora per polimerizzare il gel per.
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Preparare il campione. Aumentare la densità del
liquido campione con il 10% glicerolo o saccarosio.
Aggiungi un colorante di monitoraggio quale il fenolo
rosso o blu bromofenolo.
Per gel SDS proteici, 2X tampone di utilizzare un trat-
tamento per denaturare entrambi i campioni secco
e liquido in una provetta. Per soluzioni proteiche
liquide, aggiungere un volume uguale di 2X tampone.
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p9
Nota: Stacking gel risoluzione è
ottimale quando versato poco
prima elettroforesi.