Hoefer TE70X - Manuale (Pagina 25)

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5. Electrotransfer note
• Eseguire il trasferimento appena possibile dopo
elettroforesi per minimizzare la diffusione
proteina nel gel.
• Stacked gel devono essere tutti della stessa
dimensione.
• Limitare i trasferimenti a due ore o meno.
• La concentrazione di metanolo raccomandato
per diversi tipi di membrane sono:
tipo di membrana metanolo %
Nylon caricato 0
Nitrocellulosa 10 – 20
PVDF 10 – 20
• Usare un buffer con bassa forza ionica come uno
dei due elencati di seguito per evitare il surriscal-
damento. Utilizzare il tampone CAPS quando
Tris non possono essere utilizzati (per esempio,
peptide sequenziamento). CAPS può migliorare
il trasferimento a causa del suo effetto sulla
carica della proteina (vedi Matsudaira, 1987).
Towbin tampone
(25 mM Tris, 192 mM glycina, 20% v/v metanolo,
pH 8,3, 1 litro)
Tris (FW 121,1)
25 mM 3,0 g
Glycina (FW 75,07) 192 mM 14,4 g
SDS* (FW 288,4) 0,1% (3,5 mM) 1,0 g
Sciogliere in 600 ml di acqua distillata.
Aggiungere metanolo come richiesto
† .
Portare a 1 litro con acqua distillata. Non regolare il
pH, che deve essere compresa tra 8,2-8,4.
Optional: Chill prima dell’uso.
*Optional: Aggiunta di SDS può migliorare l’efficienza di trasferimento.
†
A seconda del tipo a membrana selezionato (vedi tabella sopra),
l’aggiunta di metanolo può migliorare i risultati di trasferimento.
Nota: tamponi contenenti metanolo
può deteriorarsi se conservata per
lunghi periodi aggiungere metanolo
poco prima del trasferimento.