Hoefer TE70X - Manuale (Pagina 22)

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4. Risoluzione dei problemi
problema soluzione
Trasferimento incompleto
Aree vuote o svenire
Rimuovere sacche d’aria intrappolate tra il gel e la
sulla membrana membrana durante il montaggio dello stack.
Buffer di utilizzo con una forza inferiore ionica.
Molecole non migrare fuori gel Controllare tutti i collegamenti elettrici. Verificare che
la corrente fluisce attraverso lo stack di trasferimento.
Verificare che il pH tampone è vicino al pH deside-
rato. La maggior parte dei buffer non deve essere
aumentata. Fai tampone fresco.
Utilizzare 3,5 mM SDS (0,1%) nel tampone di
trasferimento.
Aggiungere diversi altri fogli di tampone saturo
carta assorbente per ciascun lato del sandwich di
gel in modo che più buffer è presente durante il
trasferimento.
Aumentare il periodo di trasferimento. Frammenti
grandi possono richiedere un’ulteriore ora.
Non utilizzare la colorazione o il fissaggio agenti sul
gel prima del trasferimento.
Utilizzare un gel sottile.
Ridurre la concentrazione di acrilamide gel.
Se si utilizza un non-membrana di nitrocellulosa,
evitare anche metanolo nel tampone di trasferimento
o ridurre la quantità al minimo possibile.
Utilizzare il reagente di grado sostanze chimiche.
Aumentare la carica netta sulla proteina utilizzando
un tampone di trasferimento con un pH diverso. PH
inferiore (<6-7) aumenta la carica positiva di proteine,
pH superiore (>6-7) aumenta la carica negativa
sulle proteine .