Hoefer SE400 - Manuale (Pagina 44)

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Gel ricette
Le ricette sono gel di Laemmli per 30 ml di una soluzione singola concentrazione (suffi-
ciente per uno 1,5 mm 18 × 16 gel cm). Tabellare sono gli ingredienti e volumi per i gel
pori relativamente grandi (7,5 al 10% gamma T), così come piccoli pori gel (da 12,5 a
15% gamma T). Un gel al 4% accatastamento è comune. La ricetta gradiente lineare è di
100 ml di soluzione. Il volume totale necessaria dipende dal numero di fusione gel e lo
spessore gel; regolare come necessario. Tutti i gel sono reticolati con il 2,6% C.
Tabella 5. Laemmli ricette per gel
(gel 30 ml di soluzione risolutivo, 5 ml di soluzione di gel di impilamento)
Risoluzione gel Stacking gel
7,5% 10% 12,5% 15% 4%
L’acrilamide stock (Soluzione #1) 7,5 ml 10 ml 12,5 ml 15 ml 0,67 ml
1,5 M TrisCl, pH 8,8 (Sol. #2) 7,5 ml 7,5 ml 7,5 ml 7,5 ml
0,5 M TrisCl, pH 6,8 (Sol. #3) 1,25 ml
10% SDS (Soluzione #4) 0,3 ml 0,3 ml 0,3 ml 0,3 ml 0,05 ml
H
2
O deionizzata 14,6 ml 12,1 ml 9,6 ml 7,1 ml 3,00 ml
10% APS (Soluzione #5) 150 µl 150 µl 150 µl 150 µl 25 µl
TEMED 10 µl 10 µl 10 µl 10 µl 2,5 µl
Volume finale 30,0 30,0 ml 30,0 ml 30,0 ml 5,0 ml
Per gel sfumatura lineare, utilizzare volumi uguali di% bassa e soluzioni ad alto% di
acrilammide. Meno APS viene aggiunto per estendere il tempo di polimerizzazione, e ancor
meno viene aggiunto alla soluzione% superiore T per permettere polimerizzazione avvenga
dall’alto verso il basso. Nella nostra esperienza con le concentrazioni nell’esempio gradiente
10-20% di seguito, dieci panini gel può essere versato in un caster gel multiplo ad una
portata di 5-10 ml / min.
Tabella 6. Gradiente lineare ricette gel (per 100 ml di soluzione)
10% T 20% T
L’acrilamide stock (Soluzione #1) 33,30 ml 66,70 ml
Saccarosio — 15,00 g
1,5 M TrisCl, pH 8,8 (Solution #2) 25,00 ml 25,00 ml
10% SDS (Soluzione #4) 1,00 ml 1,00 ml
H
2
O deionizzata a 100,00 ml a 100,00 ml
10% APS (Soluzione #5) 0,300 ml 0,060 ml
TEMED 0,036 ml 0,036 ml