Hoefer SE300 miniVE - Manuale (Pagina 33)

•
p25
problema soluzione
Inefficiente vincolante
Parametri chimico
• Fissare o reticolare il mole alle esigenze di acido
nucleico, proteina di tipo, o di membrana.
• Preparare il trasferimento tampone proteica senza
SDS. SDS può migliorare l’efficienza di trasferi-
mento, ma riduce il legame.
• Verificare che la quantità ottimale di metanolo
richiesto per il tipo di membrana e controllare la
soluzione tampone. Aggiungere 10-20% metanolo
al buffer di trasferimento per migliorare legame
nitrocellulosa.
Membrana parametri • Indossare i guanti quando si maneggiano le
membrane.
• Conservare membrane correttamente. Proteggerli da
temperature estreme e luce diretta del sole.
• Se le proteine passano attraverso la membrana
selezionato, provare un diverso tipo o uno con
dimensione dei pori più piccola (0,10-0,20 µm).
• Se le proteine differenti possono essere migrazione
in direzioni opposte, inserire una membrana su
entrambi i lati del gel.
• Se il carico campione può essere superiore alla
capacità della superficie vincolante, si applicano
due membrane. Se “soffiare” si verifica, ridurre il
carico campione.
Modelli di banda diffusa • Effettuare la electrotransfer subito dopo la separaz-
ione elettroforetica.
• Ridurre o eliminare il passaggio equilibrio prima
electrotransfer, o equilibrio condotta in cella.
• Se il buffer di trasferimento contiene metanolo
(≥10%), equilibrare il gel per 30 minuti per
permettere a restringersi completamente. Nota:
contrazione del gel può rallentare la migrazione di
molecole grandi fuori dal gel.
• Fare attenzione che il gel non si muova una volta
entra in contatto con la membrana.
• Verificare che qualsiasi superficie preferita vincol-
ante della membrana si affaccia sul gel.