Hoefer SE640 - Manuale (Pagina 23)

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Preparazione del campione e Loading
Il campione può essere caricati o mentre il
sandwich è in caster o dopo la camera di tran-
sito viene fissata. Quando si caricano campioni
mentre utilizzando piastre divisorie, i campioni
devono essere caricate senza la camera tampone
superiore in posizione.
La quantità di campione caricato dipende dallo
spessore del gel, la sensibilità del metodo di
rilevamento utilizzato, e la quantità di campi-
one previsto in ciascuna banda. In un sistema
tampone continuo, il campione deve essere
relativamente concentrato, poiché non viene
utilizzato gel di impilamento. In un sistema
tampone discontinuo, la zona in cui ciascuna
specie molecolare migra è acuito dal gel di impi-
lamento, quindi il campione non deve essere così
concentrato.
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Preparare i pozzetti
Togliere il pettine delicatamente cullandolo un lato
all’altro e poi sollevando verso l’alto per evitare
di danneggiare le pareti del pozzo. Sciacquare
accuratamente ciascun pozzetto con acqua distillata
per rimuovere acrilammide non polimerizzato e quindi
scaricare invertendo il panino gel (o caster). Riempire
ogni pozzetto con tampone di elettroforesi.
Nota: Con blu Coomassie ™
è possibile rilevare 1 µg
di proteina in una singola
banda. Con le macchie
d’argento più sensibili, è
possibile rilevare un minimo
di 10 ng di proteina.