Hoefer SE900 - Manuale (Pagina 19)

• p13
Gradient Gel
Gel gradiente lineari possono essere lanciato tramite un accessorio
opzionale, l'SG500 Maker Gradient Hoefer. La mescola SG500 bassa
percentuale e alte percentuali soluzioni gel che vengono pompati nella
porta nella parte inferiore della ruota gel multiplo utilizzando una
pompa peristaltica.
Versando un Gel Linear Gradient
1 Montare il caster multiple gel come descritto a pagina 11, con le due
seguenti eccezioni:
• Non inserire la guarnizione triangolare in gomma nella parte inferiore
della ruota gel.
• Rimuovere il tappo dalla porta di ingresso dal basso.
2 Collegare un'estremità del tubo grado di laboratorio alla porta di uscita
SG500. Inserire il tubo attraverso una pompa peristaltica, e collegare
l'altra estremità alla porta di ingresso del frontalino SE915 multiple
caster gel.
3 Calcolare il volume di soluzione di monomero necessario. Dividete il
volume totale a metà e preparare questo volume di entrambi i supe-
riore e inferiore percentuale di acrilammide soluzioni.
4 Opzionale: Regolare la percentuale superiore soluzione acrilammide
al 15% (w/v) saccarosio o fino al 25% (v/v) glicerolo per migliorare la
stratificazione.
5 Versare il percentuale, o pesante, soluzione acrilammide nella camera
SG500 più lontano dalla presa. Aprire il rubinetto per il tempo neces-
sario a spostare l'aria tra le camere e poi chiudono.
6 Versare la percentuale minore, o più leggero, soluzione acrilammide
nella camera di miscelazione, la camera con l'uscita SG500.
7 Inserire un ancoretta nella camera di miscelazione. Porre a gradiente
su un agitatore magnetico, e cominciare agitazione ad una velocità che
mescola bene ma non introdurre bolle nella soluzione.
8 Accendere la pompa peristaltica a un livello basso, e aprire il rubinetto
tra le due camere SG500.
9 La soluzione gel dovrebbe lentamente strato nella regione triangolare
nella parte inferiore della ruota gel multiple, e riempire le cassette
uniformemente dal basso verso l'alto.
10 Una volta quasi tutta la soluzione è uscito la pausa produttore gradi-
ente temporaneamente la pompa, e riempire il produttore di gradiente
con ~200 ml di soluzione di spostamento. Riavviate la pompa e la
soluzione attraverso il tubo, forzando le soluzioni fino acrilammide
nelle cassette gel fino al raggiungimento dell'altezza desiderata.
Fermare la pompa.
11 Sovrapporre ogni gel con 1 ml di acqua satura di n-butanolo o buffer
gel diluito per ottenere la migliore superficie superiore gel. Lenta-
mente fornire la soluzione di sovrapposizione su un lato, minimizzando
miscelazione, e permettere la sovrapposizione di fluire attraverso la
superficie superiore nudo.
12 Lasciare i gel per polimerizzare per un minimo di un'ora. Dopo la
polimerizzazione, versare l 'overlay e sciacquare la superficie del gel
più volte con acqua distillata.
13 Preparare la soluzione di monomero gel di impilamento. Versare il gel
di impilamento al di sopra del gel risolvere. Lasciare un minimo di
un'ora per il gel di impilamento per polimerizzare.
Nota: è una buona idea fare pratica
con l'acqua e la pompa peristaltica per
determinare empiricamente i volumi e le
portate al espressi gel gradiente buone.
Nota: La soluzione di spostamento è
richiesto. La pendenza non si formerà
correttamente senza spostare il acrilammide
dentro le cassette. Esso consente
inoltre di mantenere acrilammide dalla
polimerizzazione nel tubo e nel fondo della
ruota, semplificando di pulizia. La soluzione
spostamento non deve entrare il fondo delle
cassette.
Nota: Evitare bolle d'aria nel tubo della
pompa, le bolle d'aria interferisce con la
formazione di pendenza adeguata.