Hoefer TE42 - Manuale (Pagina 29)

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Proteina di trasferimento buffer
Utilizzare un tampone con bassa resistenza
ionica, ad esempio i due indicati di seguito, per
evitare il surriscaldamento. Utilizzare il tampone
CAPS alternativo quando Tris non possono
essere utilizzati, come in sequenziamento
peptide. CAPS può migliorare il trasferimento a
causa del suo effetto sulla carica della proteina
(vedi Matsudaira, 1987). Per le proteine native,
suggeriamo di utilizzare il buffer di elettroforesi
per il trasferimento pure. Utilizzare il buffer
Towbin di trasferire SDS-denaturate le proteine
verso l’anodo.
Towbin tampone
(25 mM Tris, 192 mM glicina, 20% v/v di metanolo,
pH 8,3, 2 litri)
Tris (FW 121,1) 25 mM 6,0 g
Glycina (FW 75,07) 192 mM 28,8 g
SDS a (FW 288,4) 0,1% (3,5 mM) 2,0 g
Sciogliere in 1,5 litri di acqua distillata. Aggiungere metanolo
come richiesto
b . Portare a 2 litri con acqua distillata. Non
regolare il pH, che deve essere compresa tra 8,2 e 8,4.
Optional: Chill prima dell’uso.
a Optional: Aggiunta di SDS può migliorare l’efficienza di trasferimento.
b A seconda del tipo di membrana selezionato, l’aggiunta di metanolo
può migliorare i risultati di trasferimento (si veda la discussione e
tabella sopra). Perché tamponi contenenti metanolo può deteriorarsi
se conservata per lunghi periodi, aggiungere metanolo come richiesto
appena prima del trasferimento.
Tampone CAPS, 1X
(10 CAPS mM, pH 11,0, 5 litri)
CAPS (FW 221,3) 10 mM 11,1 g
[3-(cyclohexylamino)-1-propanesulfonic acid]
Sciogliere in 4,5 litri di acqua distillata, regolare a pH 11,0
con conc. NaOH. Regolare il volume di 5,0 litri.