Hoefer TE42 - Manuale (Pagina 14)

•
p6
Montare la cassetta di trasferimento
1
Pre-wet nitrocellulosa o membrane di nylon con acqua
distillata. Prelavaggio PVDF o altre membrane idrofobe
in metanolo. Poi assorbire tutti i tipi di membrane in
buffer di trasferimento per 2-5 minuti.
2
Aprire la cassetta rilasciando entrambe le linguette
aggancio lungo il bordo opposto alle cerniere.
Posizionare la cassetta aperta in un vassoio pieno di
almeno 3 cm di tampone di trasferimento.
3
Montare la pila di trasferimento in modo che le mole-
cole migreranno verso la membrana. Per macromole-
cole cariche negativamente (come gli acidi nucleici e
la maggior parte delle proteine), costruire la pila sulla
metà grigio della cassetta (e poi posizionare il coper-
chio in modo che il lato grigio affronta il cavo rosso, o
anodo (+).
Mettere una 3 mm di spessore spugna schiuma sulla
cassetta aperto sommersa e premere delicatamente
fino a tutta l’aria viene espulsa. Mettere un foglio di
carta assorbente sulla spugna, e quindi posizionare
la membrana sulla carta assorbente. Porre il gel che
contiene un campione che è stato separato elettro-
foreticamente e equilibrata (se richiesto) con tampone
di trasferimento, sulla membrana. Delicatamente roto-
lare una pipetta di vetro o provetta sul gel di espellere
aria intrappolata tra la membrana e il gel. Coprire
il gel con un foglio di carta assorbente e quindi
posizionare una spugna dello spessore adeguato (vedi
schema sottostante), ancora una volta una leggera
pressione per espellere l’aria intrappolata.
Nota: Indossare sempre guanti
quando si maneggiano le
membrane per evitare di lasciare
impronte su di loro.
Importante! Fare molta attenzione
a rimuovere le bolle d’aria ad
ogni passo perché la presenza
di bolle d’aria, in particolare
tra la membrana e il gel, il
trasferimento blocchi.