Hoefer PR625 Immunoblot - Manuale (Pagina 17)

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Nota 5. Montaggio delle O-ring nelle
scanalature
Se i molteplici unità di lavaggio non si adattano
con facilità nelle fessure, applicare una piccola
quantità di grasso al silicone intorno agli O-ring.
Posizionare il gruppo collettore liberamente
nella fessura e premere verso il basso sul lato del
collettore verso di voi. Quindi premere sul lato
lontano dalla sede di collettore saldamente nella
scanalatura.
Nota 6. Incubazioni anticorpo secondario
Si prega di seguire le istruzioni fornite con il
sistema occidentale di rilevamento blotting.
Quando l’anticorpo secondario viene utiliz-
zato nel ImmunoBlot ad una diluizione elevata
(1:100.000 o maggiore), una certa diminuzione
dell’intensità del segnale può essere osservato.
Ciò può essere dovuto a deplezione di anticorpi
nel piccolo volume del canale. Il problema può
essere generalmente corretta da:
1. Aumentando la concentrazione anticorpale
2-5 volte
2. Aumentando il volume anticorpo, o
3. Rimuovere la membrana dall’unità ed
eseguendo l’incubazione anticorpo secondario
in un vassoio.
Nota: Fare attenzione quando si
eseguono incubazioni cassetto
perché gli anticorpi monoclonali
a bassa affinità si può dissociare
dai loro rispettivi antigeni nel
corso del tempo. L’incubazione
in un vassoio consente di tali
anticorpi per diffondere attra-
verso la soluzione di incuba-
zione e riassociare altrove sul
blot. Tale striature è rilevabile
come macchie tra corsie campi-
one o in corsie di controllo
negativo in corrispondenza della
posizione di uno o più gruppi
fortemente reattivi.