Hoefer PR625 Immunoblot - Manuale (Pagina 10)

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Perdite – soluzione
di anticorpi si è
spostata ai canali
adiacenti. Zone aride della membrana
agiscono come stoppini per
fluidi dalle aree adiacenti. Sempre pre-bagnato prima di montare la
membrana nell'unità. Riempire ogni canale,
che copre la membrana con il tampone.
Membrane non coprire l'intera
lunghezza del canale. Assicurarsi che la membrana viene tagliato a
misura corretta.
Fluido nei canali
sovraccariche versato quando
l'unità è stata colpita
causando la contaminazione
dei canali adiacenti. Non riempire troppo i canali.
Riutilizzati pastiglie di tenuta
non sigillare correttamente. Non riutilizzare pastiglie di tenuta in quanto
comprimono durante l'uso.
Vassoio di incubazione. Considerate la vostra incubazione blot con
anticorpo secondario nella ImmunoBlot piut-
tosto che di incubazione vassoio. (Vedere
l'Appendice A:. Nota 6).
La membrana viene spogliato
di bloccare proteine. Si prega di fare attenzione a non togliere
la macchia di bloccare le proteine , mentre
il lavaggio prima dell'aggiunta di anticorpi
primari. Si prega di seguire le istruzioni dal
vostro kit occidentale rilevamento blotting. Un
protocollo campione è dato in Appendice B.
Canali non lavate conteneva
anticorpi che ha contaminato
l'esperimento. Pulire l'unità dopo ogni uso. Per i consigli per
la pulizia, vedere la sezione Clean ImmunoBlot,
a pagina 7.
Sensibilità bassa Quando bassa affinità o
anticorpi basso titolo sono
utilizzati in diluizione elevata
(1:100.000 o superiore),
una certa diminuzione di
intensità del segnale può
essere osservato. Gli anticorpi
possono essere impoverito
in piccolo volume del canale
ImmunoBlot. Aumentare la concentrazione di anticorpi
piega 2-5.
Aumentare il volume di soluzione di anticorpi
per canale. Per fare questo, inserire standard
200 µl puntali di plastica in entrambe le porte
d’ingresso per ogni canale. Questi fungono da
serbatoi per i volumi di campione più grande
del volume del canale stesso, mentre incubazi-
one a bilanciere.
Iniettare il campione degli anticorpi con una
punta che rimane poi nella porta di ingresso e
diventa un tale serbatoio.
Eseguire le incubazioni anticorpo secondario in
un vassoio. (Vedere l’Appendice A, Nota 6).
Risoluzione dei problemi
problema possibili cause raccomandazioni