Hoefer SUB Series - Manuale (Pagina 26)

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Uso delle unità orizzontali
elettroforesi su gel
Preparazione del gel di agarosio
La quantità di agarosio necessaria per dare alcuni
particolari esigenze% gel da calcolare, ad esempio
un gel 0,8% può essere preparata sciogliendo 0,8 g
di polvere di agarosio in 100 ml di tampone di
corsa. Il tipo di tampone di corsa utilizzato deve
sempre essere la stessa per il gel come quella
utilizzata nel serbatoio tampone. L’agarosio deve
essere disciolto completamente prima che il gel
può correttamente formare. Ciò può essere ottenuto
mediante riscaldamento con vorticoso in un bagno
d’acqua o incubatore impostato a 70 °C o mediante
riscaldamento in un blocco di riscaldamento
magnetico con una barra di agitazione magnetica
inserita. Il pallone deve sempre essere coperto per
impedire l’evaporazione del buffer e una maggiore
concentrazione gel risultante. Questi metodi possono
richiedere più di 1 ora per l’agarosio per sciogliere
completamente. In alternativa, l’agarosio può
essere disciolto in circa 5-10 minuti utilizzando un
forno a microonde. La soluzione di agarosio deve
essere coperto e il forno a microonde impostato su
basso. L’agarosio scioglie meglio se il microonde è
periodicamente interrotta e la soluzione roteato. Prima
di versare la soluzione di agarosio dovrebbe essere
controllato per non disciolti cristalli agarosio che
possono influenzare le caratteristiche di mobilità del
gel. Se questi sono presenti, agarosio dissoluzione
deve essere continuato. La soluzione di agarosio deve
essere raffreddato a 50-60 °C prima di versare. Se
versato a una temperatura troppo calda, il gel sarà
più probabilità di perdite e anche il pettine potrebbe
risultare distorta.
Elettroforesi su gel di agarosio
DNA mobilità
Frammenti di DNA delle dimensioni di 1 kb o meno
possono essere separati mediante elettroforesi su gel
di agarosio. Per frammenti di dimensioni inferiori a
0,1 kb, gel di poliacrilammide sono più adatti.