Hoefer SE900 - Manuale (Pagina 18)

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Preparare la soluzione di acrilammide
1 Vedi Appendice A per SDS-PAGE ricette. Per colata sei SE9102-1-1.0
gel, 400 ml è necessaria.
2 De-aerare la soluzione di gel per 5 minuti. Aggiungere l'(iniziatore)
10% w/v APS e la (catalizzatore) 10% v/v TEMED* appena prima
colata i gel. Versare la soluzione di gel nel canale nella parte posteriore
della ruota. La soluzione fluirà lungo il canale e riempire i casssettes
dal basso (Fig. 15).
* Il TEMED viene diluito al 10% per una migliore distribuzione durante
la miscelazione delle soluzioni gel.
3 Versare la soluzione come un lento flusso continuo. Provare a minimiz-
zare l'introduzione di bolle d'aria nel flusso.
4 Riempire soluzione di 0,5-1 cm sotto la parte superiore della lastra di
vetro per lasciare spazio per la striscia IPG e una guarnizione agarosio.
5 Sovrapposizione ciascun gel con un sottile strato di acqua satura
n-butanolo o tampone gel diluito per ottenere il miglior superficie sulla
sommità del gel. Lentamente applicare la sovrapposizione vicino alla
superficie del gel da un lato, avendo cura di evitare la miscelazione.
Lasciare che la sovrapposizione di fluire attraverso la superficie nudo
(Fig. 16).
6 Lasciare polimerizzare il gel per circa un'ora.
7 Rimuovere la mascherina sciacquando la superficie del gel più volte
con acqua distillata. Utilizzare tampone diluito gel come risciacquo
finale.
8 Optional-storage: I gel seconda dimensione può essere temporanea-
mente memorizzati nella caster.
I gel seconda dimensione può anche essere rimosso dal caster e
memorizzato 1-2 giorni immersi in tampone gel prima dell'uso. Vi è il
rischio che con una conservazione prolungata, l'acqua abosrb gel, e la
cassetta apre parzialmente, portando a oblique fronti tinture.
Fig 15. Versare la soluzione in un
flusso lento continuo.
Fig 16. Applicazione di overlay.
Nota: Un gel di impilamento può essere
utilizzato se desiderato, ma non è necessario.
Nota: È necessario rimuovere eventuali
sovrapposizioni butanolo prima di registrare
i gel della ruota. Lasciando in butanolo
l'incantatore può portare a sbiancamento e la
fragilità della acrilico.
Attenzione! L'acrilamide è una neurotossina.
Estrema attenzione deve essere utilizzato
durante la manipolazione e preparazione delle
soluzioni di acrilammide.