Hoefer DQ300 - Manuale (Pagina 24)

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4.2 Intervallo lineare e tempra
Il range lineare è l’intervallo di concentrazione in
cui la lettura del DQ300 è direttamente proporzio-
nale alla concentrazione del fluoroforo. Il campo
lineare inizia con la minima concentrazione rileva-
bile e si estende ad un limite superiore (concent-
razione) che dipende dalle proprietà del materiale
fluorescente, i filtri utilizzati, e la lunghezza del
percorso. Vedere lo schema qui sotto.
Una relazione non lineare è visto in concentrazioni
maggiori in cui il segnale di fluorescenza aumenta
più lentamente che il cambiamento di concent-
razione. A concentrazioni anche elevate, letture
comincerà a diminuire, anche se le concentrazioni
di campione sono in aumento. Questo effetto è
noto come “quenching segnale”.
La linearità può essere verificata diluendo un
campione 1:1 o qualche altro rapporto comodo
(accertarsi di utilizzare uno standard idoneo per
le diluizioni). Se il campione è all’interno del
range lineare, la lettura diminuisce in proporzione
diretta alla diluizione. Se la lettura non diminuisce
in proporzione diretta alla diluizione o, se gli
aumenti di lettura, il campione è oltre il range
lineare del fluoroforo.
TBS-380 User’s Manual 15
A nonlinear relationship is seen at higher
concentrations where the fluorescence signal
increases slower than the change in concentration.
At even higher concentrations, readings will begin
to decrease even though the sample concentrations
are increasing. This effect is known as "signal
quenching."
Linearity may be checked by diluting a sample 1:1
or some other convenient ratio (be sure to use an
appropriate blank for the dilutions). If the sample
is within the linear range, the reading will
decrease in direct proportion to the dilution. If the
reading does not decrease in direct proportion to
the dilution or if the reading increases, the sample
is beyond the linear range of your fluorophore.
4.3 Temperature Considerations
Fluorescence is temperature sensitive. As the
temperature of the sample increases, the
fluorescence decreases. For greatest accuracy,
0
1
2
3
4
5
6
7
0 2 4 6 8 10 12
Fluorophore conc.
R
el
at
iv
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Fl
uo
re
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en
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U
ni
t
t
Relativa
Unità
di
Fluorescenza
Fluoroforo concentrazione