Hoefer PR648 - Manuale (Pagina 7)

Applicando i vostri campioni
1
Accendere la pompa per vuoto e regolare la pompa o
la valvola di spurgo finché il vuoto è 13-25 cm Hg.
2
Spegnere il vuoto.
3
Accuratamente caricare un campione, almeno 50 µl
di volume, in ciascun pozzetto. (A 50 µl dimensioni è
necessario distribuire il campione uniformemente sulla
fessura.) Per evitare la formazione di bolle, pipetta cias-
cun campione contro il fondo della parete laterale del
pozzo. Ciò è particolarmente importante che il campi-
one contiene proteine o detergenti. Se le bolle dovreb-
bero costituire, sciacquarli con la punta pipettatore.
4
Accendere il vuoto e impostarlo a 13-25 cm Hg.
Quando tutto il liquido campione è stato tirato attra-
verso la membrana, aggiungere 1 ml di tampone
per ciascuno slot, contro il fondo pipettando-parete
laterale. Regolare vuoto di 38-50 cm Hg. Dopo tutto il
tampone viene tirato attraverso, ripetere due volte per
un totale di tre risciacqui.
Rimozione della macchia
1
Con il vuoto ancora, rimuovere le viti e con attenzione
sollevare il blocco superiore.
2
Utilizzando pinze, sollevare la membrana off e metterlo
su carta pulita e asciutta filtro. Spegnere il vuoto.
3
Elabora la membrana secondo il protocollo.
4
Se si prevede di eseguire la scansione stessa blot
con un densitometro, asciugare la membrana piatta
mettendo sul lato liscio di un foglio polyethulene
poroso. Asciugare per alcuni minuti in un essiccatore
sotto vuoto gel senza calore.
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Nota: Non utilizzare campioni
contenenti solventi organici.