Iris Sample Processing StatSpin® CytoFuge 12 Versatile Cytocentrifuge System - Manuale (Pagina 11)

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Sezione
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Preparazione dei campioni
Introduzione
La concentrazione approssimativa di cellule nel campione da centrifugare dovrebbe essere stabilita
prima dell’allestimento del vetrino con la Cytofuge 12. Campioni contenenti una quantità di cellule
superiore a quella ottimale produrranno vetrini con cellule ammassate e/o sovrapposte. Da campioni
troppo diluiti invece si otterrann
o vetrini con cellule sparse in un’area troppo grande rendendo difficile
individuazione, conta e osservazione delle stesse. Di seguito si riportano delle line guida generali per la
concentrazione dei campioni basata su diametro cellulare medio di 10 µm:
Concentrazione Diluizione
500 - 1500 cellule/µl* U tilizzare il campione così com’è
< 500 cellule/µl Pre-concentrare il campione
> 1500 cellule/µl Diluire il campione
* Campioni poveri di cellule (ad es. liquido cerebro-spinale) danno un buon risultato con una
concentrazione di 50-100 cellule/µl.
ATTENZIONE – Seguire le consuete precauzioni applicate a a tutti I campioni biologici, senza
distinzione che si sia a conoscenza o meno che il campione contenga agenti patogeni. Le
guarnizioni dello strumento non sono sufficienti da sole a garantire protezione da contaminazione da
patogeni. Caricare e scaricare il rotore sempre sotto una cappa biologica. (Vedere referenze).
Volume del campione
Utilizzare le seguenti linee guida per la quantità di campione da versare nella cuvetta:
Volume Massimo Volume ottimale
Cuvetta monouso 50 - 300 µl 100 - 300 µl
Cuvetta riutilizzabile a 1 pozzetto 300 - 1600 µl 400 - 800 µl
Cuvetta riutilizzabile a 3 pozzetti 50 - 400 µl 100 - 200 µl
Pre-concentrazione
Campioni con una ridotta quantità di cellule in sospensione devono essere concentrati preventivamente.
Se, ad esempio, il campione contiene una quantità intorno alle 100 cellule/µl, una preconcentrazione 10x
consente di ottenere 1,000 cellule/µl, che è la quantità adatta per lavorare con la Cytofuge 12.
Per concentrare il campione:
1. Trasferire 10 ml di campione in una provetta conica per centrifuga.
2. Centrifugare il campione a 1000-1500 xg per 10-15 minuti con una centrifuga convenzionale.
3. Prelevare 9 ml di surnatante.
4. Mescolare il pellet con il surnatante residuo.
5. Pipettare il volume appropriato di campione nella cuvetta della citocentrifuga.
Diluizione
Campioni con un’elevata concentrazione cellulare devono essere diluiti con soluzione fisiologica o con un
mezzo di coltura cellulare standard (p. e. Geys balanced salt solution). Aggiungere una o due gocce di
albumina per facilitare l’adesione delle cellule al vetrino.