Hoefer HE33 - Manuale (Pagina 19)

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Note, tamponi, e volumi
Elettroforesi su gel di agarosio note
Elettroforesi su gel agarosio può essere utilizzato
per frammenti di DNA separati piccoli come
0,1 kb o meno. Gel di poliacrilammide sono
di solito utilizzati per frammenti di dimensioni
inferiori a 1 kb.
DNA della mobilità
Suggeriti concentrazione di agarosio per la
separazione di frammenti di varie dimensioni
è indicato nella tabella 2 che segue. Altri
fattori che influenzano i risultati di separazione
comprendono tampone di corsa, regolazione
di tensione, temperatura, conformazione, e la
presenza di bromuro di etidio. Agaroses speciali
sono disponibili in grado di estendere gli intervalli
di risoluzione.
Uno standard comune è un Hind III digest del
fago lambda, che dà otto frammenti di dimen-
sioni variabili da 0,1 a 23 coppie kb. Per una
buona risoluzione, eseguire 45 minuti su un
10 cm di lunghezza, 1% gel di agarosio in TBE
0.5X gel a 150 V.
Tabella 2: concentrazioni di agarosio per frammenti
di DNA di varie dimensioni di separazione
portata effettiva della risoluzione
agarosio (%) di frammenti di DNA lineari* (kb)
0,5 1,0–30
0,7 0,8–12
1,0 0,5–10
1,2 0,4–7
1,5 0,2–3
*Current Protocols in Molecular Biology, p 2.5.2 (1993)