Eppendorf Multiporator - Manuale (Pagina 16)

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4.7.2 Tamponi per l'elettroporazione di cellule eucariotiche
Per ottenere sempre il massimo risultato di transfezione si devono utiliz-
zare i tamponi originali Eppendorf per elettroporazione a bassa condutti-
vità elettrica. Questi tamponi, infatti, ipo ed isosmolari, sono stati testati
per determinarne la sterilità e l'assenza di micoplasmi ed endotossine.
Utilizzando questi sistemi tampone, durante l'elettroporazione fluisce una
quantità di corrente notevolmente inferiore e, quindi, le cellule non ven-
gono gravemente danneggiate. Allo stesso tempo, utilizzando i corrispon-
denti tamponi, è possibile ottenere "pori" elettricamente indotti
notevolmente più grandi rispetto a quelli delle applicazioni ad impulsi nelle
soluzioni conduttive.
Nel caso ideale, l'elettroporazione dovrebbe avvenire in un tampone ipos-
molare. Grazie al sistema tampone iposmolare, infatti, poco prima di rice-
vere l'impulso le cellule assorbono acqua rigonfiandosi. Per diversi effetti,
come la diminuzione della tensione di break-down, questo processo
consente di raggiungere una più facile permeabilizzazione della mem-
brana plasmatica e, quindi, di aumentare notevolmente le rese rispetto a
quelle dei tamponi isosmolari. Con cellule che reagiscono con un'elevata
sensibilità ai tamponi puramente iposmolari è possibile ottenere l'osmola-
rità necessaria aggiungendo gradualmente un tampone isosmolare per
elettroporazione.
Il tampone per elettroporazione Eppendorf dovrebbe essere utilizzato per
l'elettroporazione di cellule eucariotiche (ad eccezione di lieviti ed alcuni
microrganismi e piante), mentre per l'elettroporazione di batteri e lieviti ed
altri microrganismi si possono impiegare mezzi di elettroporazione a
bassa conduttività. I protocolli di applicazione dettagliati sono disponibili
alla homepage di Eppendorf all'indirizzo www.eppendorf.com.
4 Descrizione dell’apparecchio
Multiporator_Text_it.fm Seite 144 Freitag, 9. Juni 2006 8:09 08