Eppendorf AF2200 Plate Reader - Manuale (Pagina 40)

Uso
Eppendorf
® PlateReader AF2200
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In questo caso, U è la tensione, Gain l'amplificazione scelta, 255 la massima amplificazione possibile e
1250 V la massima tensione di alimentazione possibile per il fotomoltiplicatore. Esempio: un'amplificazione
di segnale (= Gain) di 100 corrisponde a una tensione di alimentazione di 490 V:
6.3.3 Impostazioni dei flash
Misurazioni rapide con 1 flash (misurazione) per pozzetto sono possibili con tutti i tipi di piastra; la
precisione di misurazione in caso di intensità luminosa ridotta dipende tuttavia dal tempo di misurazione
durante il quale è possibile ricevere il segnale di assorbanza.
Per una rapida misurazione di fluorescenza, non serve aumentare il tempo standard di integrazione, poiché
il fotomoltiplicatore per il rilevamento non riceve altro segnale, dopo che il flash è svanito.
6.3.4 Periodo di riposo
Prima della misurazione di un pozzetto, è possibile impostare un periodo di riposo. Mediante il movimento
"stop and go" del vassoio di ricezione della piastra, il menisco del liquido dispensato può vibrare ancora
mentre il segnale viene integrato, causando fluttuazioni nei valori misurati. Questo effetto è stato osservato
nei pozzetti delle piastre da 96 e nei pozzetti più grandi.
6.3.5 Filtri raccomandati
Per garantire un fondo accettabile, è necessario dissociare il cut-off superiore delle lunghezze d'onda di
eccitazione dal cut-off inferiore delle lunghezze d'onda di emissione. Ciò dipende dalle caratteristiche dei
filtri. In molte molecole fluorescenti, il segnale può essere amplificato estendendo l'ampiezza di banda del
filtro oltre l'altro rispettivo filtro passa banda.
6.3.6 Micropiastre raccomandate
In genere, per un'elevata sensibilità di fluorescenza, è consigliabile l'utilizzo di micropiastre nere. Per la
misurazione in modalità fluorescenza inferiore consigliamo piastre nere con fondo trasparente. Non si
dovrebbero utilizzare volumi minori di un terzo del volume massimo. Utilizzando volumi inferiori, verificare
la disponibilità di un tipo di piastra più adatto.
Aumentare il numero di flash (misurazioni) per pozzetto, finché il rumore di fondo dei pozzetti
vuoti non migliora ulteriormente o finché la durata di misurazione per pozzetto non diviene
inaccettabile.
Se i valori massimi per l'eccitazione e l'emissione di un fluoroforo sono contigui, non
dovrebbero essere convertiti direttamente in lunghezze d'onda centrali per i filtri di
fluorescenza.
V = 490V 1250 *
255
100
U =